质粒电泳怎么看目的质粒的大小？质粒DNA跑电泳为什么会有三条带

本文目录

• 质粒电泳怎么看目的质粒的大小
• 质粒DNA跑电泳为什么会有三条带
• 质粒DNA电泳有何特点为什么
• 质粒dna电泳有何特点,为什么
• 质粒电泳条带比实际条带大还是小
• 质粒DNA电泳图与基因组DNA电泳图有什么区别
• 70k的质粒怎么电泳
• 质粒电泳为什么出几条杠
• 质粒DNA琼脂糖凝胶电泳的顺序是什么
• 质粒电泳时的快慢顺序

质粒电泳怎么看目的质粒的大小

首先需要知道是双酶切还是单酶切

1、单酶切

一般这种情况会根据实际大小进行判断，对于质粒来讲，有三种情况，线性质粒、超螺旋、开环结构三种，其在琼脂糖凝胶重的大小是不一样的，大小顺序，从上往下看：

开环》线性》超螺旋。

一般单酶切之后，此时的情况类似于开环结构，显示的是整个质粒的全长，此时对于maker去比对即可。

2、双酶切位点情况

这类情况被双酶切之后，产物里面有两个片段分布，一个大片段，一个小片段，从琼脂糖凝胶电泳中看，前为小片段，后为大片段。

我们再根据目的片段和质粒的实际长度对比切割后各自的长度得到我们的目的片段分布位置即可。

右侧两个为质粒对照

注意事项：

1、注意调整切割时间，尽量切割完全。

2、电泳时设置对照实验。

3、注意单酶切和双酶切位点的区分。

质粒DNA跑电泳为什么会有三条带

正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。闭环（超螺旋），开环，线形的螺旋率依次降低。

质粒DNA原则上是一条带，但通常跑胶会看到三条，这是正常情况。因为质粒是环形的DNA，稍有降解就会变成一条为线性，再厉害些，就成了线性DNA，三者在琼脂糖凝胶中速率不同，自然会出现三条带。

扩展资料：

根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。

质粒DNA电泳有何特点为什么

质粒DNA电泳特点：DNA显色带条数：质粒DNA电泳有3条带；而基因组DNA应该只有一条带或者两条带。因为：

基因组DNA电泳一般是1条带，虽然在你抽提过程中也会发生断裂，形成几十至几百kb的大片段。但是我们一般用1%的胶，无法区分不同大小的DNA，所以看起来像是一条带。如果配成0.6%的胶再加lamda hindIII marker，适当延长跑胶时间，就应该会出现几条带了。

含义

DNA纯度、缓冲液、温度条件及限制性内切酶本身都会影响限制性内切酶的活性。大部分限制性内切酶不受RNA或单链DNA的影响。当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时，会影响其进一步使用，因此在吸取限制性内切酶时，每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶，必须要注意分别提供各自的最适盐浓度。

质粒dna电泳有何特点,为什么

质粒dna电泳特点：这时电泳迁移速率又由慢变快，浓度较稀的胶线性范围较宽：超螺旋最快。因为：正常质粒是闭合的双链DNA。在电泳过程中可能使质粒发生开环，或者由开环解开螺旋变成线形。这三种形态电泳时的分离率不同，分离速度不同，分成三带。

闭环，开环，线形的螺旋率依次降低，（开环质粒是指双链环状的质粒DNA有部分解链，因此电泳速度最慢）三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋》线形》开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。判断质粒质粒好坏的一个指标就是超螺旋质粒在所以质粒中的含量。

连续梯度的实验方法

1、 测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。

2、 每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。

质粒电泳条带比实际条带大还是小

质粒电泳条带比实际条带大。质粒电泳条带比实际条带大的原因主要有以下几个：1、质粒线性化：在质粒电泳前，会将质粒进行酶切，使其线性化，方便进行大小的测定。线性化的质粒会比未切割的环状质粒要大。2、拉伸效应：在电场作用下，DNA分子会在凝胶中移动，并且会发生一定程度的拉伸。这种拉伸效应会使得质粒电泳条带在凝胶上呈现比实际大小更大的效果。3、堆积效应：在电泳过程中，质粒DNA在凝胶中会发生堆积或聚集，导致条带在凝胶上表现得更宽，从而看起来比实际条带大。4、胶溶效应：有时质粒DNA在电泳过程中会出现胶溶的现象，这会导致条带模糊或呈现不规则形状，使得条带看起来比实际大小大。

质粒DNA电泳图与基因组DNA电泳图有什么区别

质粒DNA电泳图与基因组DNA电泳图的区别：

1、DNA显色带条数：质粒DNA电泳有3条带；而基因组DNA应该只有一条带或者两条带。

2、应用技术：质粒DNA电泳图与基因组DNA电泳图都是采用了凝胶电泳技术。

质粒DNA电泳会有三条带，最远的是线形DNA（lDNA）： 质粒的两条链均断裂；线性分子；中间的是开环DNA（ocDNA）： 质粒的一条链断裂；松弛的环状分子；共价闭合环状cccDNA： 质粒的两条链没有断裂；超螺旋。质粒跑出来必须是三条带，只要的是最前端的那条带，既CCCDNA。

基因组DNA电泳一般是1条带，虽然在你抽提过程中也会发生断裂，形成几十至几百kb的大片段。但是我们一般用1%的胶，无法区分不同大小的DNA，所以看起来像是一条带。如果配成0.6%的胶再加lamda hindIII marker，适当延长跑胶时间，就应该会出现几条带了。

电泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构型，分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子迁移要快些。这就是应用凝胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。

扩展资料：

DNA电泳技术分离时影响其迁移速率的因素：

1、DNA的分子大小。线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中蠕行，因而迁移得越慢。

2、琼脂糖浓度。一个给定大小的线状DNA分子，其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。

3、DNA分子的构象。DNA分子处于不同构象时，它在电场中移动距离不仅和分子量有关，还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的，超螺旋DNA移动最快，而开环双链DNA移动最慢。

4、电源电压。在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大。要使大于2kb的DNA片段有效分离所加电压不得超过5V/cm。

5、嵌入染料的存在。荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强，还会使线状DNA迁移率降低15%。

6、离子强度影响。电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。 

70k的质粒怎么电泳

70k的质粒电泳方法如下：1、准备琼脂糖凝胶：将适量的琼脂糖加入缓冲液中，加热至溶解，然后冷却至60-70℃左右，倒入凝胶板中，插入电极，等待凝胶固化。2、加载样品：将含有70k质粒的DNA样品加入凝胶槽中。3、进行电泳：将电泳槽放入电泳槽槽中，连接电源进行电泳。根据琼脂糖凝胶的孔径大小和电场强度，DNA分子将被分离成不同大小的条带，70k的质粒会在相应的位置上出现。4、显色：将凝胶浸泡在DNA染料中，使DNA条带显色。5、可视化：使用紫外线透射仪或者其他成像设备，将凝胶中的DNA条带可视化，并进行检测和分析。

质粒电泳为什么出几条杠

如果是单酶切，超螺旋质粒会变成开链DNA，开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋质粒，因此条带会偏大，这是酶切充分的情况。如果不充分，就会有大小有差距的几条带；

如果是双酶切，而且片段大小适中，可以看见酶切的片段和载体，还有未切开的质粒。

能不能区分超螺旋质粒和开链质粒，和所用琼脂糖凝胶的浓度，电泳时间，DNA纯度有关。试着延长跑胶的时间，应当是有区别的。酶切之前就有几条带，可能是因为质粒样品中有杂带，来源于杂菌或者降解。

扩展资料：

质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体（或拟核）以外的DNA分子，存在于细胞质中（但酵母除外，酵母的2 μm质粒存在于细胞核中），具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息，是闭合环状的双链DNA分子。

质粒不是细菌生长繁殖所必需的物质，可自行丢失或人工处理而消除，如高温、紫外线等。质粒携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学性状，有利于细菌在特定的环境条件下生存。

根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。

严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。

松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳的顺序是什么

质粒DNA琼脂糖凝胶电泳中质粒超螺旋、开环、直链跑胶快慢次序依次是超螺旋、直链、开环。

琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关，分子构象越大，摩擦阻力越大，第一条带是超螺旋带应该最亮，因为超螺旋结构完整紧密，跑得最快。第二条带为直链线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA，不如超螺旋紧密，跑得相对慢 。第三条带为开环质粒，DNA双链的其中一根断开，导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构，结构臃肿，跑得最慢。

扩展资料：

琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率在于摩擦阻力的问题，琼脂就像有孔海绵分子筛，细菌质粒提取中电泳会出现三条带，最快的是超螺旋带，它是完整的，因为它的构型紧密，跑得快。 第二条带在中间，是直链带，即环状双链DNA 两条链均断开，其分子构象变为线性，不如超螺旋紧密，跑得就慢一点。最慢的是开环带，即环状双链DNA 有一条链断开，拖着一条尾巴，显得很臃肿，所以跑得最慢。

百度百科——DNA

质粒电泳时的快慢顺序

1.一般情况是超螺旋跑得最快、半开环质粒次之、线性最慢，但也有例外。2.pET28a/HindIII、pET28b/HindIII在电泳图上处于同一水平线，pET28a和pET28b应该是相同分子量；pET28a比pET28a/HindIII慢，应是所说的例外情况，可能与构象有关；pET28a/HindIII与pET28a、pET28b/HindIII与pET28b不在同一位置，说明单酶切已切开。3.线性化质粒毫无疑问是可以用的；至于pET28a只是物理性质发生改变，化学性质并未发生变化，也是可用的；